服務(wù)價格及周期

服務(wù)編號	服務(wù)內(nèi)容	服務(wù)價格	服務(wù)周期
CRI-001	CRISPR/Cas9載體構(gòu)建（常規(guī)系統(tǒng)）	600	3-4周
CRI-002	CRISPR/Cas9載體構(gòu)建（雙切口系統(tǒng)）	1200	3-4周
CRI-003	CRISPR/Cas9共轉(zhuǎn)系統(tǒng)（sgRNA與Cas9整合）	3000	4-6周
CRI-004	CRISPR/Cas9腺病毒載體構(gòu)建	800	4-6周
CRI-005	CRISPR/Cas9載體活性檢測	2000	2-3周

服務(wù)簡介
規(guī)律間隔成簇短回文重復(fù)序列（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR）本身是一種防御系統(tǒng)，用以保護(hù)細(xì)菌和古細(xì)菌細(xì)胞不受病毒的侵害。在這些生物基因組中的CRISPR位點(diǎn)能表達(dá)與入侵病毒基因組序列相匹配的小分子RNA 。當(dāng)微生物感染了這些病毒中的一種，CRISPR RNA就能通過互補(bǔ)序列結(jié)合病毒基因組，并表達(dá)CRISPR相關(guān)酶，也就是Cas，這些酶都是核酸酶，能切割病毒DNA ，阻止病毒完成其功能。

Cas9酶受sgRNA引導(dǎo)靶向切割DNA雙鏈的分子機(jī)制

該切割DNA的機(jī)制與2012年被證實廣泛適用于真核生物，從而引發(fā)了后續(xù)的以CRISPR/Cas9為基礎(chǔ)的第三代基因編輯工具的研究熱潮。在真核細(xì)胞中雙鏈的DNA打斷（Double strand break, DSB）可以引發(fā)兩種修復(fù)機(jī)制，其中非同源末端結(jié)合（Non-homologous end joining, NHEJ）可以產(chǎn)生數(shù)個堿基的隨機(jī)刪除或插入，從而引發(fā)移碼突變，這便是基因編輯工具進(jìn)行基因敲除的原理；此外在有同源序列存在時可以進(jìn)行同源重組修復(fù)，該機(jī)制可以實現(xiàn)外源基因的敲入或者定點(diǎn)修飾。

CRISPR/Cas9技術(shù)特點(diǎn)

相比前兩代基因編輯工具ZFN系統(tǒng)和TALEN系統(tǒng)，其優(yōu)點(diǎn)顯著：

首先，CRISPR-Cas9系統(tǒng)的可用位置更多。理論上基因組中每8個堿基就能找到一個可以用CRISPR-Cas9進(jìn)行編輯的位置，可以說這一技術(shù)能對任一基因進(jìn)行操作，而TALEN和ZFN系統(tǒng)則在數(shù)百甚至上千個堿基中才能找到一個可用位點(diǎn)，這大大限制了使用范圍。

其次，Cas9擴(kuò)展性強(qiáng)，正如本公司使用的Cas9n，是一種只進(jìn)行單鏈切割的Cas9突變型，該酶可以大大降低切開雙鏈后帶來的非同源末端連接造成的染色體變異風(fēng)險。此外還可以將Cas9蛋白連接其他功能蛋白，來在特定DNA序列上研究這些蛋白對細(xì)胞的影響。

第三，更為重要的是，CRISPR-Cas9系統(tǒng)的使用極為方便，只需要替換一段核酸序列，幾乎任何實驗室都可以開展工作。

CRISPR/Cas9載體構(gòu)建服務(wù)優(yōu)勢

• 本公司提供的質(zhì)粒均來源于最新的頂尖雜志中已使用過的系統(tǒng)，其有效性已被反復(fù)被驗證。
• 靶點(diǎn)的篩選: 不同靶點(diǎn)的有效性存在差異，本公司免費(fèi)為您設(shè)計三個特異性靶點(diǎn)。
• 載體系統(tǒng)的構(gòu)建：腺病毒CRISPR系統(tǒng)、雙切口CRISPR系統(tǒng)、lentiCRISPR系統(tǒng)、常規(guī)CRISPR系統(tǒng)等，根據(jù)客戶的不同需要，提供個性化載體構(gòu)建服務(wù)。

客戶須知

1. 客戶可根據(jù)后續(xù)實驗需求選擇合適的系統(tǒng)進(jìn)行CRISPR/Cas9載體定制服務(wù)。
2. 客戶需要提供外顯子序列或者基因登陸號。

CRISPR gRNA 載體

載體名稱	gRNA啟動子	All-in-one vector?	選擇標(biāo)記
pSpCas9 BB-2A-GFP (PX458)	U6	是，CBh啟動子啟動Cas9表達(dá)，N端含DYK& NLS	AmpR,GFP
pLentiCRISPR v2	U6	是，EFS啟動子啟動Cas9表達(dá)，C端帶DYK	AmpR, PuroR, BleoR
pLentiGuide-Puro	U6	否，pLentiCas9-Blast載體免費(fèi)提供，以用于共表達(dá)	AmpR, PuroR

服務(wù)承諾

1. 以上服務(wù)價格均為針對單個靶點(diǎn)設(shè)計的CRISPR/Cas9系統(tǒng)，并不保證所選靶點(diǎn)的切割效率，建議同時購買三個靶點(diǎn)以篩選出最優(yōu)靶點(diǎn)；
2. 提交的結(jié)果包含第三方測序報告，序列準(zhǔn)確無誤，確認(rèn)提供的質(zhì)粒和第三方測序結(jié)果一致；
3. 利用熒光顯微鏡來檢測CRISPR/Cas9載體活性，細(xì)胞熒光表達(dá)情況的強(qiáng)弱可以反應(yīng)靶點(diǎn)的有效性。